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首頁-譜標服務-怎樣選擇高效液相色譜柱?

怎樣選擇高效液相色譜柱?

發布時間:2018-09-11       點擊次數:9224

現代高效液相色譜中,分離效果好壞的一個重要指標是色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,為選擇合適的,這里總結三點色譜填料: 硅膠基質填料、聚合物填料、其他無機填料。

一.硅膠基質填料

1.正相色譜

   正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其他具有極性官能團胺基團,如(NH2,APS)和氰基團(CN,CPS)的鍵合相填料。

   由于硅膠表面的硅輕基(SiOH)或其他極性基團極性較強,因此,分離的次序是依據樣品中各組份的極性大小,即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。

   正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,如:正己烷(Hexane)、氯仿(Choroform)、二氯甲烷 (Methylene Cloride)等。

2.反相色譜

   反相色譜用的填料常是以硅膠為基質,表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。

   反相色譜所使用的流動相極性較強,通常為水、緩沖掖與甲醇、乙情等的混合物。

   樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份最先被沖洗出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。

  常用的反相填料有:C18(ODS)、C8(MOS)、C4(Butyl)、C6H,(Phenyl)等。

二.聚合物填料

    聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等,其主要優點是在pH值為1一14均可使用。

    相對于硅膠基質的C18填料,這類填料具有更強的疏水性;大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。

    現有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料,色譜柱柱效較低。

三.其他無機填料

       其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化.由于其特殊的性質,一般僅限于特殊的 用途.如石墨化碳也用于正逐漸成為反相色譜填料.這種填料的分離不同與硅膠基質烷基 鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎,不再需其它的表面改性,該柱填料一般比烷基 鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強,石墨化碳可用于分離某些幾何導構體,又由 于HPLC流動相中不會被溶解,這類柱可在任何PH與溫度下使用.氧化鋁也可用于HPLC, 氧化鋁微粒剛性強,可制成穩定的色譜柱柱床,其優點是可在PH高達12的流動相中使用. 但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強,應用范圍受到一定的限制,所以未能廣泛應用, 新型氧化鋯填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應 用PH范圍1~14,溫度可達100℃.由于氧化鋯填料幾年才開始研究,加之面臨的實驗難 度,其重要用途與優勢尚在進行中.

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