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傳統檢測單糖、雙糖的分析方法有化學法、光譜法、GCMS、HPLC等方法。其中化學法無法準確測定單種糖的含量;光譜法的工作繁瑣、誤差比較大;GC-MS方法需要進行衍生化反應,前處理復雜,不利于快速分析;HPLC法雖然相比其他方法靈敏度好、檢測速度快、適用范圍廣,但也存在檢出限較低、抗干 擾能力差,尤其對于食品中低濃度的單糖、雙糖很難進行精確的測定,無法滿足現階段對食品檢測快速、靈敏、準確的要求。LCMS/MS技術通過質譜的高選擇性和高靈敏度能夠降低目標物的檢出限、提高檢測的重現性。
由于糖類為水溶性化合物,在常規的C18色譜柱上沒有保留, 而采用其他填料的親水色譜柱也很難得到太好的峰形或分離度。 因此,選取一款合適的分析糖的色譜柱是液質分析糖的實驗關鍵點。目前專門測試糖的糖柱通常為液相柱,需要用到100%純水相來作為流動相,并且流速通常高于1 mL/min,這樣的色譜條件對于大多數的質譜離子源來說都無法實現化合物的有效離子化, 或者只有通過分流才能實現,但是分流后將損失儀器的檢測靈敏度,失去了使用液質聯用儀測試糖的提高靈敏度的目的。
二手AB SCIEX 的 LC-MS/MS液質聯用系統的一大特點就是強大的TurboV離子源技術,離子源的加熱能夠達到750℃,ESI源耐受流速 范圍 5 μL/min~3.0 mL/min,APCI源耐受流速范圍50 μL/ min~3.0 mL/ min,因此可以直接使用HPLC糖柱在SCIEX液質聯用儀上進行測試, 即實現了好的分離效果,又提高了檢測靈敏度。
實驗使用二手
液質聯用
SCIEX 質譜系統同時測定梨中的葡萄糖、果糖、蔗糖 和山梨醇四種糖, 實驗方法簡單、靈敏度高、選擇性好。
實驗思路: 1. 配制果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇標準曲線,測試四種水溶性 糖的低檢出限;
2. 測試碭山酥梨果實中四種水溶性糖的含量,了解梨中四種糖的比例關系。
樣品處理 : 1.移取果糖、葡萄糖、蔗糖和山梨醇標準品,用純水稀釋,配制 成 50 ng/mL、100 ng/mL、500 ng/mL、1 μg/mL、5 μg/mL 和 10 μg/mL 的標準溶液。
2.梨果實中可溶性糖的提取。
梨果實中糖的提取
材料:碭山酥梨(采集于南京農業大學江浦園藝實驗站) 將樣品去皮削成小塊,液氮速凍后儲存于-80冰箱。稱取2g樣品,加液氮研磨后,加入80%乙醇7 mL混勻。在37℃水浴中恒溫 30 min,超聲提取15 min,10000 r/min離心15 min。將上清液移 入25 mL容量瓶。重復提取3次,然后加入80%乙醇定容至25 mL。取2 mL溶液旋轉蒸發,用1 mL水溶解蒸干后的固體,溶解時用超 聲波處理,盡量溶解完全。溶液離心后,用0.22 μm水系濾膜處 理,即可用于測定。實驗過程中發現此前處理過程提取出的糖樣品在液質儀器上 的響應信號過高,后樣品又用純水稀釋10倍和1000倍分別上機測試。
色譜方法色譜柱:Hi-Plex Ca, 300×7.7 mm; 流動相:100%純水洗脫 流速:1 mL/min; 柱溫:85℃; 進樣量:10 μL。
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