二手HPLC液相色譜系統的許多問題都能在譜圖上反映出來。其中有一些問題可以通過改變設備參數得到解決；而其他的問題必須通過修改操作程序來解決。對于色譜柱和流動相的正確選擇是二手高效液相色譜儀HPLC得到好的色譜圖的關鍵。
                              

（一）二手HPLC譜圖峰拖尾的原因和解決方法 
1、篩板阻塞 ：反沖色譜柱，更換進口篩板，更換色譜柱 ；
2、色譜柱塌陷 ：填充色譜柱 ；
3、干擾峰 ：使用更長的色譜柱，改變流動相或更換色譜柱 ；
4、流動相PH選擇錯誤 ：調整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰 ；
5、樣品與填料表面的溶化點發生反應圖 ：加入離子對試劑或堿性揮發性修飾劑，更改色譜柱。

（二） 二手HPLC譜圖 峰前延的原因和解決方法 
1、柱溫低 ：升高柱溫 ；
2、樣品溶劑選擇不恰當 ：使用流動相作為樣品溶劑 ；
3、樣品過載：降低樣品含量 ；
4、色譜柱損壞：反沖色譜柱，填充色譜柱。

（三） 二手HPLC譜圖 峰分叉的原因和解決方法

1、保護柱或分析柱污染圖 ：取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質污染，運用適當的再生措施。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

2、樣品溶劑不溶于流動相 ：改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。

（四） 二手HPLC譜圖 峰變形的原因和解決方法 
樣品過載 ：減少樣品載量

（五） 二手HPLC譜圖 早出的峰變形的原因和解決方法 
樣品溶劑選擇不恰當 ：減少進樣體積，運用低極性樣品溶劑。

（六） 二手HPLC譜圖 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰的原因和解決方法 
柱外效應：調整系統連接（使用更短、內徑更小的管路），使用小體積的流通池。

（七） 二手HPLC譜圖 K’增加時，脫尾更嚴重的原因和解決方法 
1、二級保留效應，反相模式：加入三乙胺（或堿性樣品），加入乙酸（或酸性樣品），加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品），更換一支柱子 ；
2、二級保留效應，正相模式 ：加入三乙胺（或堿性樣品），加入乙酸（或酸性樣品），加入水（或多官能團化合物），試用另一種方法 ；
3、二級保留效應，離子對：加入三乙胺（或堿性樣品）。

（八） 二手HPLC譜圖 酸性或堿性化合物的峰拖尾的原因和解決方法 
緩沖不合適：使用濃度50-100mM的緩沖液，使用Pka等于流動相PH值的緩沖液。

（九） 二手HPLC譜圖 額外的峰的原因和解決方法 
1、樣品中有其他組份：正常 ；
2、前一次進樣的洗脫峰 ：增加運行時間或梯度斜率，提高流速；
3、空位或鬼峰：檢查流動相是否純凈，使用流動相作為樣品溶劑，減少進樣體積。

（十） 二手HPLC譜圖 保留時間波動的原因和解決方法 
1、溫控不當 ：調好柱溫 ；
2、流動相組分變化 ：防止變化（蒸發、反應等） ；
3、色譜柱沒有平衡 ：在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱。

（十一） 二手HPLC譜圖保留時間不斷變化的原因和解決方法 

1、流速變化 ：重新設定流速 ；
2、泵中有氣泡 ：從泵中除去氣泡 ；
3、流動相選擇不恰當 ：更換合適的流動相；選擇合適的混合流動相。