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離子淌度譜( Ion mobility spectrometry,IMS )是一種強(qiáng)大的分析技術(shù),在過去五十年中已得到廣泛應(yīng)用,主要應(yīng)用于化學(xué)物理和分析化學(xué)應(yīng)用。直到最近才探索了 IMS 與 MS( IMS-MS )聯(lián)用的潛力,用于肽段和蛋白質(zhì)的分離、鑒定和定量。
timsTOF 系列質(zhì)譜儀
通過將 TIMS 分析器整合到四極桿飛行時間( QTOF )質(zhì)譜儀的前端,離子可在釋放用于 MS 分析之前在一段特定時間內(nèi)進(jìn)行累積。多肽離子在 TIMS 中進(jìn)行淌度分離和釋放( ~ 100 ms ),然后在檢測器中進(jìn)行檢測,產(chǎn)生 TIMS 的 MS 熱圖;經(jīng) TIMS 分離的多肽離子進(jìn)入四極桿中進(jìn)行隔離并選擇母離子,母離子選擇過程是在離子釋放的過程中同步進(jìn)行。zui后母離子和碎片離子根據(jù)淌度值進(jìn)行對齊。
TIMS
捕集離子淌度譜( TIMS )是氣相中的 IMS 分離技術(shù),除了 HPLC 分離和質(zhì)譜分析,它通過增加分離維度來應(yīng)對復(fù)雜樣品,提高了峰容量和化合物表征的信息。同樣重要的是,TIMS 分析器還用于積累和富集給定質(zhì)量和淌度值的離子,從而在靈敏度和速度上得到提高,同時增加分離的維度。
特別的前端TIMS分析儀針對更高速度的霰彈蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行了優(yōu)化,能從較小樣品量中獲得突出識別性能。其特別的雙TIMS幾何形狀允許在第1個TIMS部分中并行累積,并且在實(shí)時執(zhí)行額外的TIMS分離步驟之后,離子從第二個TIMS部分釋放出來,用于MS / MS碎裂。這致使近乎100分的占空比,使這種平行堆積和連續(xù)碎裂(PASEF)技術(shù)在酶促消化的蛋白質(zhì)混合物的可重復(fù)納流LC-MS分析中具有前所未you的性能。
使用雙 TIMS 技術(shù),現(xiàn)在可使高靈敏度、高速的 shotgun 蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)現(xiàn)近 100分 的離子利用率。新穎的設(shè)計(jì)允許離子在前段積累,而后段的離子根據(jù)離子淌度值順序釋放。此過程稱為 PASEF®( Parallel Accumulation Serial Fragmentation,平行累積連續(xù)碎裂 )技術(shù)。
PASEF®
在速度方面,布魯克專家重新設(shè)計(jì)了 MS/MS 技術(shù),以滿足 shotgun 蛋白質(zhì)組學(xué)的要求。借助 PASEF® 技術(shù),可以實(shí)現(xiàn) > 100 Hz 的測序速度;低豐度的多肽通過多次選擇并碎裂,其 MS/MS 譜圖質(zhì)量顯著提高。
用于PASEF質(zhì)譜法的 timsTOF Pro系統(tǒng),其使用專有的捕獲離子遷移譜(TIMS)技術(shù),實(shí)現(xiàn)了出色的單次肽和蛋白質(zhì)鑒定性能,具有更高速、更高靈敏度和強(qiáng)大的高通量蛋白質(zhì)組學(xué)分析能力。
PASEF能力代表了性能的改進(jìn),因?yàn)樗峁└哽`敏度和更高速度的霰彈蛋白質(zhì)組學(xué),而不損失質(zhì)量分辨率。PASEF消除了這些臨界限制,對于高靈敏度的近百分的占空比,同時保持兩個前體的超高質(zhì)量分辨率和產(chǎn)物離子。利用雙TIMS技術(shù)的這一重要PASEF功能為科學(xué)家們提供了深入研究復(fù)雜生物學(xué)和發(fā)現(xiàn)低水平生物學(xué)重要蛋白質(zhì)的潛力的工具,或臨床蛋白質(zhì)組學(xué)研究中進(jìn)行縱向研究。
布魯克timsTOF Pro質(zhì)譜也有利于定量蛋白質(zhì)組學(xué)工作流程,因?yàn)檫@種創(chuàng)新的TIMS-powered的四極桿飛行時間質(zhì)譜儀(QTOF-MS)由MaxQuant/Perseus和PEAKS Studio蛋白質(zhì)組學(xué)分析軟件支持。
定量蛋白質(zhì)組學(xué)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的一個關(guān)鍵領(lǐng)域,雙TIMS-powered的PASEF提供的固有優(yōu)勢超過門控、串聯(lián)時間和基于FT的MS分析儀局限性。新的timsTOF Pro提供超過四個數(shù)量級的具有低肽負(fù)載(100-200ng)的動態(tài)肽,使其適用于小細(xì)胞群體的蛋白質(zhì)組學(xué)和生物臨床研究中經(jīng)常遇到的低樣本量。
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