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在發展中求生存,不斷完善,以良好信譽和科學的管理促進企業迅速發展具有靈活多樣的掃描組合方式是Orbitrap Fusion的優勢之一,包括可以使用CID、HCD、ETD、DDDT等不同的裂解模式,可以使用Orbitrap或離子阱掃描檢測,可任意選擇破裂和檢測模式進行MS分析,可同時選擇多個二級離子進行三級定量分析(SPS技術)等。
通過考察蛋白質組學最常用的掃描方式:OT-HCD-IT、OT-CID-IT、OT-HCD-OT、OT-CID-OT。使用這四種掃描方式對酵母全蛋白進行60分鐘有效梯度的數據采集,并對鑒定結果進行分析、比較。
比較了四種掃描方式在蛋白鑒定數量、肽段鑒定數量、PSM數量、譜圖數、譜圖鑒定率五方面的差異,并以OT-HCD-IT結果作為100%進行歸一化。
結果表明,OT-HCD-IT由于速度zui快,因此獲得的譜圖數和鑒定數zui多;OT-CID-IT相比前者掃描速度略慢5%,因此獲得的結果略少,譜圖數和蛋白鑒定數約是前者的95%;OT-HCD-OT與Q-Exactive質譜的掃描方式相同,由于無法實現一級二級的同時運行,譜圖數和蛋白鑒定數分別是OT-HCD-IT的70%和85%;OT-CID-OT速度zui慢,譜圖數和蛋白鑒定數分別是OT-HCD-IT的60%和75%。此外,四種掃掃描方式鑒定率相差不大,表明數據質量沒有明顯差異。
與HCD相比,CID雖然速度略慢且有三分之一效應,但靈敏度更高,更適合于低豐度蛋白和少量樣本分析。二級Orbitrap檢測常用于定量蛋白質組學研究,TMT/iTRAQ標記定量、PRM定量都要用到二級分辨率、高質量精度。四種掃描方式有著各自的特點,適用于不同的應用方向,所以根據實驗目的不同選擇合適的掃描方式非常重要。
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